JBCS

INTRODUÇÃO

A sinefrina (Figura 1) é uma amina adrenérgica presente em plantas do gênero Citrus sp, disponível atualmente em produtos dietéticos para o emagrecimento. Em 2004 o órgão americano Food and Drug Administration (FDA) proibiu para uso a efedrina (Figura 1) em suplementos alimentares devido à associação clínica com problemas cardíacos e o sistema nervoso central. Neste contexto, a sinefrina, que é um alcaloide alternativo à efedrina, ganhou popularidade no tratamento da obesidade e encontra-se presente na formulação de diversas preparações disponíveis comercialmente.^1,2 O interesse por produtos contendo sinefrina se deve a sua similaridade estrutural com a efedrina e seus supostos efeitos lipofílicos, que têm sido associados ao aumento da lipólise por meio da promoção da termogênese, presumivelmente por meio de adrenoreceptores β₃. No entanto, estudos demonstram que essa amina age também em adrenoreceptores β₁ e β₂, e seu uso indiscriminado pode levar ao desenvolvimento de efeitos adversos graves, que podem ser piorados com a associação com outros estimulantes, elevando o risco de cardiotoxicidade.^1,3,4 Essa preocupação já levou o Healt Canada a suspender seu uso em produtos dietéticos.⁵ Entretanto, segundo alguns dados da literatura, a sinefrina está entre os cinco ingredientes mais vendidos em suplementos alimentares para o emagrecimento.⁶ Neste contexto, tornam-se imprescindíveis estudos para contribuir com o controle de qualidade de produtos à base dessas substâncias.

Figura 1. Estrutura química da sinefrina (A) e efedrina (B)

A sinefrina está presente no extrato seco de Citrus aurantium, conhecido no Brasil como laranja-amarga, laranja-azeda e laranja-cavalo, pertencente à família Rutaceae.⁷ Esse extrato é utilizado como matéria-prima no mercado nacional em diferentes produtos dietéticos, suplementos alimentares e compostos manipulados em farmácias magistrais, mas, até o momento, não possui monografia em códigos oficiais ou farmacopeia. Nesse intuito, o maior problema relacionado a estes produtos está na falta de padronização e no deficiente controle de qualidade, tanto do extrato utilizado, como do produto final, fatos que comprometem diretamente a garantia da sua composição química, teor de princípio ativo, estabilidade, segurança e eficácia, refletindo em prejuízo terapêutico à população, além de potencial toxicológico.

Alguns trabalhos já propuseram a determinação da sinefrina e aminas correlatas em amostras de Citrus aurantium e suplementos alimentares.^8-13 No entanto, verificou-se não haver estudos publicados na literatura que contemplem o desenvolvimento de métodos indicativos da estabilidade e, tampouco, estudos que relatam a estabilidade da sinefrina em condições forçadas de armazenamento.

Portanto, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento e validação de método analítico por CLAE-DAD, bem como a realização de estudo preliminar da estabilidade da sinefrina em extrato seco de Citrus aurantium utilizando condições forçadas de armazenamento.

EXPERIMENTAL

Produtos químicos e reagentes

Sinefrina usada como substância química de referência, com teor declarado de 98%, foi adquirido da empresa Sigma-Aldrich. Extrato seco de Citrus aurantium contendo 6,2% de sinefrina, conforme especificado pelo certificado de análise, foi adquirido da empresa DEG Importação de produtos Químicos Ltda (São Paulo, Brasil). Os reagentes utilizados foram acetonitrila (grau CLAE, Tedia, Fairfield, EUA), ácido o-fosfórico (Merck, Darmstadt, Alemanha) e trietilamina (Merck, Darmstadt, Alemanha) e a água ultra-pura foi obtida pelo sistema Direct-Q UV 3 Milli-Q^® (Merck Millipore, Milford, MA, EUA).

Equipamento e condições cromatográficas

As análises cromatográficas foram realizadas em cromatógrafo líquido Shimadzu (LC-20AT Prominence), com sistema dotado de bomba quaternária, amostrador automático, detector de arranjo de fotodiodo (DAD), degaseificador e controlador (Shimadzu, Kyoto, Japan).

A coluna Thermo Scientific C18 ODS Hypersil (250 × 4,6 mm, 5 µm, Cheshire, Inglaterra) acoplada a uma pré-coluna Phenomenex SecurityGuard C18 (4,0 × 3,0 mm, 5 µm, Torrance, CA, EUA) foram utilizadas para as separações cromatográficas. A fase móvel foi composta por uma mistura binária de ácido o-fosfórico 0,01% (v/v) pH 3,0 ajustado com trietilamina: acetonitrila (85:15, v/v). Os componentes da fase móvel foram filtrados sob vácuo, através de uma membrana de nylon com diâmetro de 47 mm e poro de 0,45 µm (Millipore, Billerica, MA, EUA). A vazão da fase móvel foi de 1,0 mL min^-1 e o volume injetado de amostra foi 20 µL. A temperatura de análise foi de 25 ºC, com detecção em 220 nm.

Preparo da solução padrão

A solução de sinefrina foi preparada em água destilada pela dissolução de 15 mg de sinefrina em balão volumétrico de 100 mL. Após, 2 mL foram transferidos para um balão volumétrico de 10 mL e o volume completado com água, obtendo concentração final de 30 µg mL^-1. A solução foi homogeneizada e filtrada em membrana de nylon com diâmetro de 13 mm e poro de 0,45 µm (Millipore, Billerica, MA, EUA).

Preparo da solução amostra

Cerca de 241,9 mg de extrato seco (equivalente a 15 mg de sinefrina) foram pesados e transferidos para balão volumétrico de 100 mL com o auxílio de 80 mL de água destilada. A amostra foi sonicada em ultrassom por 30 min para extração da sinefrina, à temperatura ambiente. Foi completado o volume com o mesmo solvente e a solução transferida para tubos de ensaio para posterior centrifugação a 3000 rpm por 30 min. Uma alíquota de 2 mL foi transferida para um balão volumétrico de 10 mL e o volume completado com água, atingindo concentração final de 30 µg mL^-1 de sinefrina. A solução foi homogeneizada e filtrada em membrana de nylon com diâmetro de 13 mm e poro de 0,45 µm (Millipore, Billerica, MA, EUA).

Estudos de degradação

O estudo de degradação teve como intuito verificar a estabilidade da sinefrina e a capacidade indicativa de estabilidade do método, ou seja, a determinação o analito na presença de produtos formados. O padrão de sinefrina e o extrato seco de Citrus aurantium foram submetidos a condições forçadas de armazenamento, de modo a conduzir os estudos de degradação.¹⁴

Degradação do padrão de sinefrina

A solução de sinefrina, para a hidrólise ácida, foi preparada pela dissolução de 15 mg do padrão com ácido clorídrico 1 mol L^-1, em balão volumétrico de 100 mL (150 µg mL^-1 de sinefrina). Após, foi submetida à sonicação por 10 minutos e, posteriormente, ao refluxo (80 ºC) por 4 h. A hidrólise básica seguiu os mesmos procedimentos, sendo conduzida ao refluxo (80 ºC) com hidróxido de sódio 5 mol L^-1 por 6 h. Após o arrefecimento à temperatura ambiente as amostras foram neutralizadas. Uma alíquota de 2 mL de cada solução foi transferida para respectivo balão volumétrico de 10 mL e diluída em água, obtendo-se concentração final de 30 µg mL^-1 de sinefrina.

Para a realização da degradação oxidativa foram transferidas para balão volumétrico de 10 mL alíquotas de 2 mL de peróxido de hidrogênio 10% e 2 mL de solução de sinefrina em água na concentração de 150 µg mL^-1. O balão foi mantido por 48 horas ao abrigo da luz, à temperatura ambiente. Após esse período o volume do balão foi completado com água, obtendo-se a concentração final de 30 µg mL^-1 de sinefrina e analisada imediatamente por CLAE.

Para avaliação da fotodegradação foi preparada uma solução estoque em água, equivalente a 1.500 µg mL^-1 de sinefrina. Uma alíquota de 1 mL dessa solução foi diluída em balão volumétrico de 10 mL com acetonitrila e exposta à luz UVC - 254 nm em cubetas descartáveis por 1 h, com temperatura controlada. Posteriormente, uma alíquota de 2 mL foi transferida para balão volumétrico de 10 mL e o volume completado com água, obtendo-se a concentração final de 30 µg mL^-1 de sinefrina.

Em todos os casos, após atingir a concentração de trabalho de 30 µg mL^-1 de sinefrina, as amostras foram filtradas em membrana de nylon com diâmetro de 13 mm e poro de 0,45 µm.

Degradação do extrato de Citrus aurantium

A degradação ácida do extrato ocorreu pela diluição de 1,2097 g do mesmo, (equivalente a 75 mg de sinefrina) em um balão volumétrico de 50 mL, ao qual foi adicionado cerca de 40 mL de água destilada. A amostra foi sonicada em ultrasson por 30 min para extração da sinefrina. Foi completado o volume com o mesmo solvente e a solução transferida para tubos de ensaio para posterior centrifugação a 3000 rpm por 30 min. Uma alíquota de 5 mL foi transferida para um balão volumétrico de 50 mL e o volume completado com ácido clorídrico 1 mol L^-1, atingindo concentração final de 150 µg mL^-1 de sinefrina. Esta solução foi submetida ao refluxo (80 ºC) por 5 h. A hidrólise básica também foi conduzida sob refluxo (80 ºC) com hidróxido de sódio 5 mol L^-1 por 6 h. Após, as amostras foram arrefecidas à temperatura ambiente e neutralizadas. Uma alíquota de 2 mL de cada solução foi transferida para respectivo balão volumétrico de 10 mL e diluída em água, obtendo-se concentração final de 30 µg mL^-1.

Para a realização da degradação oxidativa foram transferidas para balão volumétrico de 10 mL alíquotas de 4 mL de peróxido de hidrogênio 30% e 2 mL de solução de sinefrina em água na concentração de 150 µg mL^-1. Esta solução foi armazenada à temperatura ambiente e protegida da luz por 72 h. Após esse período, o volume do balão foi completado com água, obtendo-se a concentração final de 30 µg mL^-1 de sinefrina, e analisada imediatamente por CLAE. A condição da degradação oxidativa imposta ao extrato (H₂O₂ 30%, por 72 h) foi empregada devido a estudos preliminares que demostraram que não ocorreu degradação da sinefrina em condições mais brandas, como as usadas com o padrão (H₂O₂ 10%, por 48 h).

Para avaliação da fotodegradação foi preparada uma solução estoque do extrato em água, equivalente a 1.500 µg mL^-1 de sinefrina. Após passar pelas etapas de sonicação e centrifugação, uma alíquota de 1 mL desta foi diluída em balão volumétrico de 10 mL com acetonitrila e exposta à luz UVC - 254 nm em cubetas descartáveis por 20 h, com temperatura controlada. Posteriormente, uma alíquota de 2 mL foi transferida para balão volumétrico de 10 mL e o volume completado com água, obtendo-se a concentração final de 30 µg mL^-1 de sinefrina.

Em todos os casos, após atingir a concentração de trabalho de 30 µg mL^-1 de sinefrina, as amostras foram filtradas em membrana de nylon com diâmetro de 13 mm e poro de 0,45 µm.

Validação do método analítico

A validação do método analítico foi conduzida conforme a The United States Pharmacopoeia (USP 36),¹⁵ os guias do International Conference on Harmonisation (ICH)^16,17 e artigos científicos especializados.^18,19

Linearidade

A linearidade foi determinada pela construção de três curvas de calibração com cinco pontos cada. A solução estoque (150 µg mL^-1) de sinefrina foi preparada em água e alíquotas foram transferidas para balões volumétricos de 10 mL, obtendo a concentração final de 15; 22,5; 30; 37,5 e 45 µg mL^-1. As curvas padrão foram obtidas pela construção de gráficos de concentração versus área absoluta. A equação da reta foi determinada por meio do estudo de regressão linear pelo método dos mínimos quadrados e a análise de variância por ANOVA foi realizada para verificação da linearidade do método.

Limite de detecção e limite de quantificação

O limite de detecção (LD) e o limite de quantificação (LQ) foram calculados a partir das fórmulas descritas no ICH, baseadas no desvio padrão do intercepto e na inclinação da curva de calibração. Para confirmação dos valores teóricos calculados foram preparadas soluções de sinefrina em água e analisadas experimentalmente (n = 6).

Especificidade

A especificidade, ou seja, a capacidade do método em determinar o fármaco, com pureza adequada, na presença dos produtos formados, e a capacidade indicativa de estabilidade do método foram avaliadas utilizando degradação forçada do fármaco e do extrato, em condições de oxidação, fotodegradação e hidrólise ácida e básica, por meio da determinação da pureza do pico estabelecida pelo detector DAD. Este parâmetro de validação foi avaliado concomitantemente aos estudos de degradação citados anteriormente.

Precisão

A precisão do método foi determinada pelo ensaio de repetibilidade (precisão intradia) e precisão intermediária (precisão interdia), sendo o resultado expresso como estimativa do desvio padrão relativo (DPR), conforme o resultado obtido em seis medições intradia e dezoito medições interdia da solução do extrato na concentração correspondente a 30 µg mL^-1. Os dados para a precisão intermediária foram coletados em dias diferentes e por analistas diferentes.

Exatidão

A exatidão foi determinada a partir de ensaio de recuperação de padrão, isto é, por meio da adição de quantidades conhecidas de padrão nas soluções amostra (extrato de Citrus aurantium). Alíquotas de 1, 2 e 3 mL de um padrão de sinefrina com concentração de 50 µg mL^-1 foram transferidas para balões volumétricos de 10 mL contendo solução amostra na concentração de 30 µg mL^-1, visando avaliar a porcentagem de recuperação em cada nível de concentração. Cada solução foi preparada em triplicata.

Robustez

A robustez do método foi avaliada por meio de pequenas e deliberadas modificações nas condições cromatográficas, tais como vazão (0,8 e 1,2 mL min^-1), pH da fase aquosa (2,8 e 3,2), proporção da fase móvel (10:90 e 20:80) e tempo de extração (25 e 35 min).

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Desenvolvimento e otimização do método

As condições cromatográficas que resultaram em adequados parâmetros analíticos foram definidas após teste de diferentes fases móveis, proporção da fase orgânica, pH da fase aquosa e fluxo da fase móvel. Os testes iniciais foram realizados em mistura binária de acetonitrila:água na proporção de 30:70 (v/v), com pH na faixa de 2,5 a 3,5, ajustado com ácido fosfórico. Também foi avaliado o sistema de vazão gradiente e isocrático, na faixa de 0,6 a 1,5 mL min^-1. Não obtendo êxito na separação cromatográfica, nova fase móvel foi testada, sendo esta composta por acetonitrila:ácido fosfórico 0,1% na proporção 15:85 (v/v). Com essa fase móvel foram investigados o efeito do pH (2,5 e 3,0) e da vazão, que variou de 0,6 a 1,0 mL min^-1.

Na tentativa de otimizar as condições cromatográficas, outra mistura de solventes foi investigada, desta vez acetonitrila:ácido fosfórico 0,01% nas proporções 30:70, 25:75, 20:80 e 15:85 (v/v) com pH 2,8 e 3,0 e vazão que variou de 0,6 a 1,0 mL min^-1. Finalmente, a fase móvel constituída por acetonitrila:ácido fosfórico 0,01% (v/v) pH 3,0 (ajustado com trietilamina), numa proporção 15:85 (v/v) e vazão de 1,0 mL min^-1 foi definida para dar prosseguimento aos experimentos, pois apresentou bons resultados nos parâmetros de adequabilidade do sistema, tais como número de pratos teóricos (N = 9000), simetria de pico (T = 1,19) e reprodutibilidade das injeções (RSD = 0,5, n = 5). A fase móvel empregada é de fácil e rápido preparo, o que permite ser usada rotineiramente nas análises de controle de qualidade. Outra vantagem é o fato de não apresentar sais em sua composição, que poderiam ocasionar danos à coluna e ao sistema cromatográfico.

Estudos de degradação

Os estudos de degradação forçada foram conduzidos com o intuito de desenvolver uma avaliação preliminar da estabilidade do fármaco frente a diferentes condições de armazenamento, bem como avaliar a seletividade e a capacidade indicativa de estabilidade do método proposto.

Degradação do padrão de sinefrina

Na Figura 2A, pode-se observar o cromatograma típico da sinefrina padrão na concentração de 30,0 µg mL^-1. Quando submetido a condições ácidas de degradação (HCl 1 mol L^-1 por 4 h), houve um decaimento de 36% na área do pico da sinefrina e o surgimento de um produto de degradação em aproximadamente 2,6 min de análise (PD1b), como pode ser observado no cromatograma da Figura 2B. Na degradação alcalina (NaOH 5 mol L^-1) por um período de 6 h o percentual de degradação foi de aproximadamente de 10%, com o surgimento de quatro produtos de degradação (PD1c, PD2c, PD3c e PD1c), como pode ser observado na Figura 2C. Também, alguns aspectos em relação às características físicas desta amostra devem ser considerados, pois após o período de exposição da degradação alcalina apresentou coloração levemente amarelada e uma espécie de precipitado, provavelmente devido a algum dos produtos de degradação formados.

Figura 2. (A) Cromatograma típico da soluçao padrao de sinefrina 30,0 µg mL^-1 por CLAE com detecçao em 220 nm; (B) degradaçao ácida (HCl 1 mol L^-1, 4 h) e produto de degradaçao (PD1b); (C) degradaçao alcalina (NaOH 5 mol L^-1, 6 h) e produtos de degradaçao (PD1c, PD2c, PD3c e PD4c); (D) degradaçao oxidativa (H₂O₂ 10 %, 48 h) e produtos de degradaçao (PD1d, PD2d e PD3d); (E) fodegradaçao (UVC-254 nm, 1 h) e produtos de degradaçao (PD1e, PD2e, PD3e, PD4e e PD5e)

Na degradação oxidativa (H₂O₂ 10%, por 48 h) o decaimento do pico referente à sinefrina foi de aproximadamente 30%, com a ocorrência de um expressivo produto de degradação com pequeno tempo de retenção, praticamente junto ao volume morto, em 2 min (PD1d). Outros dois produtos de menor concentração (PD2d e PD3d), como pode ser observado na Figura 2D, também foram formados nas condições testadas. Os resultados da degradação fotolítica estão demonstrados na Figura 2E, na qual pode ser observado a ocorrência de picos adicionais de menor concentração (PD1e, PD2e, PD3e, PD4e e PD5e), além do sinal relativo à sinefrina com decréscimo na área do pico de, aproximadamente, 30% após 1 h de exposição.

Degradação do extrato de Citrus aurantium

Na Figura 3A pode-se observar o cromatograma típico da sinefrina no extrato de Citrus aurantium na concentração de 30,0 µg mL^-1. Quando o extrato foi submetido às condições de degradação ácida (HCl 1 mol L^-1) por 5 h, ocorreu a formação de dois produtos de degradação (PE1b e PE2b), com decréscimo de 28,6% na área do pico da sinefrina (Figura 3B). A degradação alcalina resultou no surgimento de novos produtos de degradação (PE1c, PE2c, PE3c e PE4c), além de um decréscimo na área do pico da sinefrina de aproximadamente 10%, praticamente o mesmo percentual de degradação apresentado na degradação alcalina do padrão de sinefrina (Figura 3C). Todavia, também apresentou as mesmas características físicas, quando na degradação do padrão após 6 h de aquecimento. Na degradação oxidativa foram realizadas algumas análises do extrato nas mesmas condições impostas ao padrão (H₂O₂ 10% em 48 h), mas os resultados obtidos não demonstraram degradação da sinefrina. Devido a essas características específicas do extrato optou-se por aumentar a concentração do peróxido de hidrogênio e também o tempo de exposição (H₂O₂ 30% em 72 h). Ao contrário do que foi visualizado na degradação oxidativa do padrão, na degradação do extrato houve pouco decaimento na área do pico da sinefrina, em torno de 5%, mas com o surgimento do produto de degradação majoritário em torno de 2 min, como ocorreu na degradação do padrão (Figura 3D). Na análise dos cromatogramas da degradação oxidativa do padrão e do extrato percebe-se menor decaimento do pico da sinefrina no extrato, mesmo com o reagente mais concentrado e maior tempo de exposição. Sugere-se que essa diferença provavelmente ocorra devido à presença de compostos com características antioxidantes no extrato de Citrus aurantium, como mencionado na literatura.^20,21

Figura 3. (A) Cromatograma típico da sinefrina 30,0 µg mL^-1 em extrato de Citrus aurantium, por CLAE com detecçao em 220 nm; (B) degradaçao ácida (HCl 1 mol L^-1, 5 h) e produtos de degradaçao (PE1b e PE2b); (C) degradaçao alcalina (NaOH 5 mol L^-1, 6 h) e produtos de degradaçao (PE1c, PE2c, PE3c e PE4c); (D) degradaçao oxidativa (H₂O₂ 30 %, 72 h) e produto de degradaçao (PE1d); (E) fotodegradaçao (UVC-254 nm, 20 h) e produtos de degradaçao (PE1e, PE2e e PE3e)

Quando submetido à degradação frente à luz por 20 h ocorreu redução de aproximadamente 42% na área do pico da sinefrina e a formação de alguns produtos de degradação (PE1e, PE2e e PE3e) que foram resolvidos do pico do fármaco, como pode ser observado na Figura 3E.

A partir da análise dos cromatogramas, nos estudos de degradação do padrão e do extrato, pode-se verificar que o método proposto teve êxito na separação da sinefrina dos produtos de degradação formados. Além disso, permitiu a análise quantitativa da sinefrina na presença dos produtos de degradação e constituintes da matriz, portanto, pode-se afirmar que o método pode ser empregado como indicativo da estabilidade. Nas condições testadas, os resultados também demonstram a susceptibilidade da sinefrina quanto à degradação ácida, básica, oxidativa e fotolítica, indicando a necessidade de um maior cuidado quando na manipulação ou armazenamento de formas farmacêuticas ou suplementos alimentares à base de extrato seco de Citrus aurantium.

Validação do método

A validação do método foi realizada com base na avaliação dos seguintes parâmetros analíticos: especificidade, linearidade, repetibilidade, precisão intermediária, exatidão e robustez. De acordo com alguns autores e o ICH a validação deve seguir a metodologia analítica, no entanto, os resultados podem seguir os critérios de aceitação estipulados para métodos bioanalíticos, considerando-se a complexidade do extrato vegetal, permitindo, assim, limites de aceitação maiores em relação aos métodos analíticos.^17,22

A linearidade do método foi verificada por meio da construção de curvas padrão de sinefrina (concentração versus área do pico). O método mostrou-se linear na faixa de 15 a 45 µg mL^-1 e o estudo de regressão linear pelo método dos mínimos quadrados forneceu uma equação da reta y = 47.808,23x - 34.115,19. O coeficiente de correlação (r) de 0,9996 demonstrou concordância entre as concentrações utilizadas e as áreas absolutas dos picos obtidas.

A análise por ANOVA demonstrou haver regressão linear significativa (a) sem desvio da linearidade (b):

a) F _calculado = 7691 > F _crítico = 4,96; p < 0,05

b) F _calculado = 1,109 < F _crítico = 3,71; p < 0,05

Na determinação do limite de quantificação o valor teórico encontrado foi de 0,25 µg mL^-1, o qual correspondeu ao obtido experimentalmente, com DPR de 1,50 (n = 6). Para o limite de detecção o valor teórico encontrado foi de 0,08 µg mL^-1, o qual correspondeu ao obtido experimentalmente, com DPR de 2,20 (n = 6). Os resultados obtidos demostram boa sensibilidade do método proposto.

A especificidade e a capacidade indicativa de estabilidade foram confirmadas pela capacidade do método em determinar o fármaco na presença de produtos de degradação e dos constituintes presentes no extrato de Citrus aurantium, considerado uma matriz complexa. Na análise utilizando o detector de arranjo de fotodiodos foram feitas varreduras espectrais dos picos de sinefrina e os resultados obtidos sugerem elevada pureza (> 99,9%) em todas as determinações realizadas. Esses resultados, apesar de não serem confirmatórios, corroboram com a especificidade e seletividade do método no sentido de um indicativo da não co-eluição de produtos de degradação ou compostos constituintes da matriz com a sinefrina, nas condições analisadas.

Os resultados da precisão, obtidos para o método proposto, foram expressos como DPR e podem ser visualizados na Tabela 1. Em todos os testes realizados foi observado que o método, além de apresentar resultados coerentes com os limites estabelecidos pela legislação vigente, também apresentou baixos DPR, indicando o elevado nível de precisão do método.

O teste de exatidão avaliou a porcentagem de recuperação obtida em cada nível de concentração de sinefrina, sendo que para cada concentração foram realizadas três determinações. A recuperação média foi de 102,03% (DPR = 0,79), como pode ser observado na Tabela 2.

Os testes revelaram que pequenas e deliberadas modificações nas condições cromatográficas não resultaram em problemas na quantificação da sinefrina, confirmando a robustez do método proposto. Os resultados deste teste podem ser visualizados na Tabela 3.

CONCLUSÃO

O método desenvolvido por CLAE-DAD comprovou ser simples, linear, preciso, exato e específico, demonstrando satisfatórios resultados frente aos parâmetros testados. Também mostrou-se adequado para quantificação da sinefrina em extrato de Citrus aurantium, podendo ser usado para análise da mesma e também de produtos de degradação em estudos de estabilidade. Nas condições testadas, os resultados demonstram a susceptibilidade da sinefrina frente à degradação forçada, indicando a necessidade de cuidados na manipulação e/ou armazenamento de produtos à base de extrato seco de Citrus aurantium.

AGRADECIMENTOS

À CAPES pelo suporte financeiro.

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