JBCS

INTRODUÇAO

Segundo o Relatório Global sobre Desenvolvimento e Agua 2015, das Organizaçoes das Naçoes Unidas (ONU), a tendência para 2030 é que a populaçao global, em pleno crescimento, necessite de 35% a mais de alimento, 50% a mais de energia e conviva com um déficit de 40% de água.¹ Esta previsao chama a atençao no que concerne a qualidade dos produtos oferecidos para atender essa crescente demanda. Dentre estas preocupaçoes pode-se destacar o uso de agrotóxicos na produçao de alimentos. Somente o mercado brasileiro de agrotóxicos totalizou US$12,249 bilhoes em 2014, contra US$11,454 bilhoes em 2013, representando aumento de 6,9% em apenas 12 meses.²

A presença de agrotóxicos em alimentos e no meio ambiente vem sendo mostrada em estudos realizados nessa área, relatando a presença em quantidades traços desses compostos.^3-6 Resultados de uma análise de águas da regiao da chapada do Apodi-CE, divulgado pelo dossiê ABRASCO,⁷ destaca que o carbaril, um pesticida da classe química dos carbamatos, foi detectado em todas as amostras de água analisadas.

Os carbamatos vêm substituindo, com frequência, os compostos organofosforados e, principalmente, os organoclorados nas plantaçoes devido sua baixa persistência nos meios ambientais e biológicos.^8,9 A baixa persistência dessa classe de agrotóxicos se deve à instabilidade térmica, hidrólise ocorrida em pHs básicos (Figura 1) ou facilidade em sofrer oxidaçoes.^10,11

 

 

No entanto, na literatura especializada sao encontrados vários trabalhos que reportam o efeito toxicológico do carbaril em ratos, como a inibiçao da AchE;^12,13 alteraçoes em marcadores de estresse oxidativo e parâmetros bioquímicos séricos;¹⁴ prejuízos à respiraçao celular e toxicidade mitocondrial quando presente em elevadas concentraçoes,¹⁵ além de contribuir para o desenvolvimento de alergia, doenças auto-imunes, câncer ou infecçoes, facilitada pelo desequilíbrio da resposta imune Th1/Th2.¹⁶

Sua toxicidade também é confirmada em peixes,^17,18 em girinos, atuando como um perturbador endócrino e afetando as vias biológicas associadas aos hormônios da tireóide¹⁹ e nas espécies Folsomia candida, Eisenia andrei, Triticum aestivum e Brassica rapa observando-se o aumento dessa toxicidade com a variaçao da temperatura.²⁰ Esses efeitos observados têm gerado uma preocupaçao na utilizaçao do carbaril, embora o mesmo seja rapidamente metabolizado e excretado pelas espécies intoxicadas.

Nesse contexto é de fundamental importância que novas metodologias de análises sejam desenvolvidas para o monitoramento desse e de outros pesticidas em amostras biológicas de seres humanos que se expoem de maneira continua a esses compostos.^21-25

Esse trabalho teve como objetivo analisar carbaril em amostras de plasma sanguíneo de trabalhadores rurais do perímetro irrigado da Chapada do Apodi-CE, pelo sinal cromatográfico do produto de degradaçao térmica 1-naftol, com o intuito de avaliar o grau de exposiçao ao qual esses trabalhadores estao sujeitos, associando à possível detecçao desses agrotóxicos a anormalidades cromossômicas já evidenciadas na literatura.^26,27

 

PARTE EXPERIMENTAL

Reagentes e soluçoes

Carbaril (Sigma-Aldrich^® - 99,8%) e pirimicarbe (Sigma-Aldrich^® - 98,5%) utilizado como padrao substituto (PS) ou "padrao surrogate", metanol (Sigma-Aldrich^® - 99,9%), acetona (Sigma-Aldrich^® - 99,9%), hidrogêno fosfato de sódio Na₂HPO₄ (Vetec^® - 99,0%), di-hidrogêno fosfato de sódio KH₂PO₄ (Vetec^® - 98,0%) e cloreto de sódio NaCl (Vetec^® - 99,0%) foram usados. A água utilizada foi obtida através de um sistema de purificaçao de água Milli-Q (Millipore^®).

Soluçoes padrao estoque de carbaril e pirimicarbe (PS) 10 mg L^-1 foram preparadas separadamente em metanol e armazenadas a -20 °C. As demais soluçoes padroes foram obtidas por diluiçao da soluçao padrao estoque, com metanol, no momento da análise. A soluçao tampao Sorensen pH 5,5 foi preparada pela mistura de 25 mL de Na₂HPO₄ 0,084 mol L^-1 e 475 mL de KH₂PO₄ 0,067 mol L^-1 e armazenadas a 4 °C.

Condiçoes do CG-EM

As análises cromatográficas foram realizadas utilizando um cromatógrafo gasoso (Shimadzu GC-2010), equipado com detector seletivo de massas (Shimadzu GCMS QP-2010), com coluna capilar de sílica fundida DB-5 (20 m x 0,18 mm d.i. x 0,4 µm). As condiçoes experimentais foram: temperatura do injetor, interface e fonte de íons de 260, 270 e 260 °C, respectivamente, gás de arraste hélio com velocidade linear do método determinada experimentalmente, para garantir a melhor eficiência da coluna e injetor no modo splitless. A programaçao de temperatura do forno foi iniciada com 80 °C durante 1 minuto e elevada a 165 °C a 20 °C/min, subsequentemente elevou-se a 225 °C a 10 °C/min, finalmente, a 290 °C a 35 °C/min, sendo a temperatura final mantida por um minuto. O espectrômetro de massas foi operado no modo íon-positivo de impacto de elétrons (IE) a 70 eV. Os fragmentos foram analisados entre 40-450 m/z. Na determinaçao semi-quantitativa MIS (monitoramento de íons selecionados), utilizou-se um único fragmento para cada composto, carbaril (1-naftol) 144 m/z e pirimicarbe 166 m/z, sendo o segundo utilizado como padrao substituto.

Condiçoes da MEFS-Headspace e preparo da amostra de plasma

Foram avaliados três tipos diferentes de revestimentos comerciais disponíveis (PDMS/DVB - 65 µm, PA - 85 µm e CAR/PDMS - 75 µm) obtidos na Supelco^®. Um planejamento experimental do tipo 2² com componente central foi realizado com as variáveis temperatura e força iônica (NaCl). Quando necessário foi utilizado uma expansao do planejamento, para planejamento em estrela com adiçao dos níveis ±√2 (planejamento quadrático), conforme a Tabela 1. As fibras foram condicionadas no injetor do CG com temperatura e tempo recomendado pelo fabricante. Após esse condicionamento as fibras eram submetidas a uma limpeza no injetor do CG a uma temperatura de 260 °C durante 10 min, sempre e antes de qualquer extraçao.

 

 

O frasco (vial 40 mL) foi colocado em um sistema sob agitaçao magnética constante de 1000 rpm e o pH 5,5 foi ajustado com soluçao tampao. A fibra foi introduzida através do septo e mantida no espaço superior do vial (modo Headspace) por um tempo de extraçao fixo de 20 minutos, posteriormente, retirada e imediatamente inserida no sistema de injeçao de CG durante 7 minutos para a dessorçao dos analitos. Após determinada às melhores condiçoes do planejamento, um estudo da variaçao do tempo de extraçao (5 - 180 minutos) foi realizado, para que o tempo de equilíbrio fosse determinado.

Para o preparo das amostras de plasma sanguíneo, cedidas pelo departamento de Medicina Clínica da UFC, uma alíquota de 500 µl foi transferida para um eppendorf de 1,5 mL, sendo adicionados 50 µL de metanol e 650 µL de acetona para precipitaçao das proteínas e essa soluçao foi agitada em vortex por 30 segundos. A amostra foi centrifugada por 12 minutos a 4000 rpm, o sobrenadante foi transferido para o vial e concentrado a 500 µL com fluxo de gás nitrogênio. Em seguida 0,875 g de NaCl e 2,5 mL de soluçao tampao Sorensen pH 5,5 foram adicionados e o vial imediatamente tampado com um septo PTFE.

Condiçoes do RMN H¹

Para determinaçao dos deslocamentos químicos (δ) para os sinais de H, dos padroes de carbaril e 1-naftol foi utilizado o sistema RMN, Brucker, modelo Avance DRX-300 e modelo Avance DRX-500. Para a obtençao dos espectros, 10 mg de amostra padrao de carbaril foi dissolvida em 100 µL metanol em vial de 40 mL e submetida às condiçoes de extraçao otimizadas no planejamento fatorial; a amostra foi entao liofilizada, e foram adicionados 10 mL de metanol para separar os analitos dos sais inorgânicos. Essa soluçao foi levada à secura sob fluxo de N₂ e, em seguida, foram adicionados 600 µL de clorofórmio deuterado. A partir daí deu-se a análise da soluçao por RMN. O espectro obtido foi confrontado com os espectros individuais dos padroes para determinaçao da % de 1-naftol produzido pela degradaçao térmica do carbaril nas condiçoes de trabalho.

Validaçao do método

O método foi validado segundo as orientaçoes ANVISA.^28,29 Embora as mesmas nao sejam específicas para análise de pesticidas em amostras biológicas, sao as que melhor orientam a validaçao de metodologia bioanalítica no Brasil.

Seletividade

A seletividade do método foi avaliada em amostras de plasma obtidas de seis indivíduos, sendo 4 amostras normais, uma lipêmica (amostra com alto teor de lipídeos) e uma hemolisada (amostra biológica contendo hemácias lisadas em grau pré-definido e especificado pelo laboratório bioanalítico).

Efeito residual

Foram realizadas três injeçoes da mesma amostra branco, sendo uma antes e duas logo após a injeçao de uma amostra processada do Limite Superior de Quantificaçao (LSQ). Esses resultados foram comparados com aqueles obtidos das amostras processadas do Limite Inferior de Quantificaçao (LIQ), sendo esses limites de quantificaçao a maior e a menor concentraçao da curva de calibraçao, respectivamente.

Linearidade, Limite de Detecçao (LD) e Limite de Quantificaçao (LQ)

A curva analítica foi determinada pelo método de superposiçao da matriz (matrix-matched), em que quantidades conhecidas do agrotóxico foram adicionadas à amostra de plasma branco de um mesmo paciente saudável, nas seguintes concentraçoes 12,0; 30,0; 40,0; 90,0; 130,0; 180,0 µg L^-1. Foi também adicionada à matriz, antes do processo de MEFS-HS, concentraçao conhecida do (PS). Esse padrao é um composto quimicamente diferente da substância de interesse, mas representativo de seu comportamento, com o intuito de corrigir pequenas mudanças em variáveis experimentais (extraçao e análise). Algumas vezes este composto é denominado padrao interno.³⁰ A resposta analítica foi determinada através da razao entre as áreas analito/(PS), obtidas no cromatograma.

A linearidade e o modelo matemático "equaçao da reta" foram determinados pelo Método dos Mínimos Quadrados Ordinários (MMQO), e devido às análises estatísticas de falta de ajuste, através da tabela de teste F de variância³¹ (ANOVA) e heterocedasticidade, através da análise dos resíduos,^32,33 assim como utilizando os testes de Cochran e F de Hartley,³³ fez-se necessária uma expansao do modelo, para o Método dos Mínimos Quadrados Ponderados (MMQP), adotando-se como peso (w_i), com o intuito de corrigir variaçoes nos resíduos "heterocedasticidade" e tornar o modelo mais realístico e adequado ao conjunto de dados,³² sendo esses tratamentos estatísticos melhor descritos em Souza et al. (nao publicado).³⁴

Sendo, s_i^-2 o inverso da variância, e n é o número de pontos da curva (n = 6)

O LD foi determinado como sendo três vezes os desvios padrao do intercepto (b_wi) dividido pelo coeficiente angular de três curvas e o LQ determinado como sendo dez vezes o desvio padrao do intercepto, dividido pelo coeficiente angular de três curvas.

Precisao e exatidao

A precisao e exatidao do método foram avaliadas em dois níveis (intra e intercorridas), feitas em amostras de plasma de pacientes saudáveis; o plasma foi dopado em níveis de concentraçao, baixo LIQ, médio CM e alto LSQ, com replicatas de cada ponto (n = 5), sendo a precisao determinada em funçao do desvio padrao relativo da concentraçao obtida na linearidade e a exatidao determinada em funçao da recuperaçao da concentraçao média experimental e a concentraçao média estimada pela linearidade do método.

Aplicaçao do método em amostras de pacientes voluntários

Amostras de sangue de 10 trabalhadores da regiao de Limoeiro do Norte-CE, cenário de intensos conflitos devido ao número elevado de casos de câncer e ao elevado uso de agrotóxicos, foram coletadas por meio de doaçao voluntária, selecionadas de acordo com o histórico de vida dos pacientes de diferentes faixas etárias e sexo; as amostras foram processadas para separaçao do plasma sanguíneo, pelo grupo de Citogenômica do Câncer, do Departamento de Medicina da Universidade Federal do Ceará, e entao analisadas pelo método aqui desenvolvido.

Esse estudo foi desenvolvido em parceria com a pesquisa: Estudo das alteraçoes citogenômicas da medula óssea de trabalhadores rurais expostos a agrotóxicos,²⁷ tendo aprovaçao pelo Comitê de Ética em Pesquisa do Hospital Universitário Walter Cantídio da Universidade Federal do Ceará, através do Protocolo CEP N° 016.02.11, cumprindo todas as exigências da resoluçao 196/96 do Conselho Nacional de Saúde.

 

RESULTADOS E DISCUSSAO

Otimizaçao do método para quantificaçao do carbaril em CG-EM

Com base na característica de instabilidade térmica do carbaril, já bem estabelecida na literatura,^8,9,35,36 a quantificaçao desenvolvida nesse trabalho foi realizada pelo monitoramento do sinal do seu único produto de degradaçao térmica (Figura 2a), indicado pelo banco de dados de espectros de massa do software do equipamento CG-EM e confirmado pela injeçao de seu padrao como sendo o 1-naftol (Figura 2b).

 

 

Pela inspeçao do cromatograma apresentado na Figura 2a é possível observar claramente o perfil de degradaçao térmica do carbaril, sendo o mesmo quase que totalmente convertido em 1-naftol (94%) quando exposto às condiçoes de alta temperatura do injetor (260 °C) que, associadas à presença dos grupos silanóis do liner, potencializam o processo de degradaçao térmica do analito.³⁷ Na Figura 2b é possível observar que o composto 1-naftol é estável termicamente, o que possibilita sua utilizaçao como composto de referência na quantificaçao do carbaril.

Condiçoes MEFS-headspace por planejamento experimental 2² utilizando componente central designer

Existem muitos fatores que influenciam a eficiência de extraçao dos analitos, como o revestimento de fibra de MEFS, temperatura de extraçao, tempo de extraçao, força iônica e agitaçao, dentre outros.³⁸ Uma efetiva agitaçao é necessária em análises de amostra de sangue, devido à elevada viscosidade da amostra e inferior coeficiente de difusao do analito.³⁹

A avaliaçao da análise de variância para o modelo linear mostrou-se insatisfatória, sendo entao necessária a expansao para um modelo quadrático. Assim, foi realizado em um segundo bloco (dias diferentes) e a análise de variância (Tabela 2) mostrou que esse é o modelo mais adequado e que melhor representa a superfície de resposta estudada.

 

 

Para o modelo proposto, o termo (x₂)² da equaçao foi desprezado, pois o mesmo nao foi significativo para a determinaçao de y.

Quanto às fibras avaliadas, a PDMS/DVB foi escolhida como a de melhor rendimento, embora a fibra PA tenha mostrado um sutil aumento na área do pico cromatográfico, para o carbaril (Figura 3). Os motivos pelos quais a fibra PDMS/DVB foi escolhida está relacionado aos melhores resultados na precisao das duplicatas para cada ponto, assim como sua característica de polaridade mista, podendo esta fibra interagir tanto com compostos de baixa polaridade como o padrao substituto pirimicarbe, o analito carbaril e compostos de maior polaridade como o 1-naftol produto de degradaçao térmica do carbaril.^40,41

 

 

Após a escolha da fibra, observou-se que o comportamento nao linear da superfície de resposta sugere uma expansao do planejamento linear para quadrático, o que pode ser confirmado pelo gráfico de superfície de resposta após expansao (Figura 4) e pelo estudo da ANOVA análise de variância (Tabela 2).

 

 

De acordo com o gráfico da Figura 4, a variável temperatura demonstra possuir bastante influência na extraçao do analito, confirmado pela Figura 5. Isso de fato é esperado para compostos com baixa constante de Henry na MEFS-headspace, o que indica que um novo planejamento com a expansao da temperatura poderia melhorar os resultados, uma vez que a condiçao ótima para o planejamento parece nao ter sido alcançada. Contudo, aumentar ainda mais a temperatura nessas condiçoes significa também o aumento da pressao interna no interior do vial, o que nao parece ser sensato por medidas de segurança, sendo que também ocorre o aumento do coeficiente de difusao no sistema, gerando uma diminuiçao da quantidade extraída quando o equilíbrio é alcançado, Portanto, é importante otimizar cuidadosamente a temperatura de extraçao para os tempos de equilíbrio mais curtos e para sensibilidades aceitáveis.⁴²

Conforme observado no gráfico de pareto (Figura 5), a temperatura se mostrou como o único parâmetro significativo na extraçao do carbaril. A interpretaçao desse gráfico é importante quando se deseja realizar robustez do método de extraçao, uma vez que a pouca significância da força iônica e da interaçao entre as variáveis indicam que sao possíveis variaçoes na força iônica dentro do intervalo estudado, sem que influencie significativamente na eficiência da extraçao.

 

 

O estudo do tempo de equilíbrio (Figura 6) nos mostrou que a partir de 40 minutos houve uma pequena variaçao na área do pico cromatográfico do composto extraído, entrando em equilíbrio após 120 minutos. Para tempos de equilíbrio longos, um pré-equilíbrio para quantificaçao pode ser considerado, desde que as condiçoes do sistema (temperatura, agitaçao, força iônica, pH, dentre outros) sejam mantidas constantes.^42,43

 

 

Por fim, dadas as condiçoes de limitaçao no aumento da temperatura, discutidas anteriormente, e das características do analito e do modo de extraçao (headspace), e devido ao baixo valor na constante de Henry do composto (9,20.10^-5 Pa m³ mol^-1),⁴¹ foi adotado um tempo de extraçao (pré-equilíbrio) para o método de 40 minutos. Esse tempo é necessário pelo fato de o analito precisar difundir-se a partir da fase condensada antes de atingir a fibra. Nesse caso, a extraçao pode ser otimizada com agitaçao mais eficiente ou, o que seria inviável, o aumento da temperatura de extraçao.⁴² Com isso, observa-se que incorporar as variáveis agitaçao e tempo de extraçao, em um novo planejamento experimental, possam otimizar ainda mais o tempo de extraçao, tornando o método ainda mais eficiente.

Degradaçao térmica do carbaril na MEFS-headspace determinada por RMN H¹

Como pode ser observado na Tabela 3, os deslocamentos referentes aos padroes individuais do carbaril e do 1-naftol, o singleto referente ao H-2' em 2,85 ppm é específico para o carbaril (Figura 7), sendo que a relaçao entre esse singleto e o duplo dubleto em 8,21 ppm no H-8 do 1-naftol pode fornecer de maneira direta a relaçao de degradaçao térmica do carbaril em 1-naftol nas condiçoes de extraçao estudada, que seria de 7,75% de 1-naftol produzido.⁸

 

 

 

 

A Figura 7 mostra o espectro RMN H¹ do padrao carbaril após este ser submetido às condiçoes de MEFS-headspace com expansao dos sinais 6,6 - 8,2 ppm. Como pode ser observado, a determinaçao de degradaçao pôde ser determinada pela relaçao entre os sinais de hidrogênio aromático H-8 do carbaril e H-8 do 1-naftol, por estarem em um ambiente químico muito semelhante, sendo o sinal H-8 do carbaril um multipleto em 7,94 ppm e do H-8 do 1-naftol um duplo dubleto em 8,21 ppm. Assim, ao considerar o sinal do H-8 do carbaril como 1,00, obtém-se um sinal de integraçao correspondente para o H-8 do 1-naftol de 0,08, sugerindo que aproximadamente 8,0% de 1-naftol é produzido pela degradaçao térmica do carbaril após ser submetido as condiçoes de MEFS do método, resultado esse semelhante à relaçao anterior feita entre os sinais H-8 do 1-naftol e H-2' do carbaril.

A análise de RMN H¹ mostra, com essa pequena quantidade de carbaril convertida em 1-naftol, que o processo de hidrólise foi pouco significativo; sabemos que esse processo pode ser expressivo em pHs neutro e básico,⁴⁴ assim como por influência do solvente e em temperaturas elevadas.⁸ Por esse motivo adotou-se o pH 5,5 e optou-se por nao aumentar a temperatura de extraçao, expandindo com isso o planejamento experimental e, nessas condiçoes, observar a interaçao do próprio analito com os revestimentos das fibras de MEFS, principalmente por esse trabalho nao avaliar a metabolizaçao (hidrólise) do carbaril no organismo humano e por nao saber em qual forma predominante o composto se encontraria no plasma.

Validaçao do método

Seletividade

Pelo fato da matriz biológica "plasma" ser uma matriz bastante complexa, é importante que se consiga uma boa seletividade para o método. A utilizaçao da MEFS-HS como técnica de preparo da amostra se mostra bastante interessante, juntamente com o uso do modo MIS (Monitoramento de Ions Selecionado) no EM, monitorando apenas o íon de interesse e eliminando assim possíveis interferentes.

O método se mostrou seletivo para as amostras, uma vez que nao foram detectados interferentes nos mesmos tempos de retençao dos compostos analisados 1-naftol e pirimicarbe (PS), com as injeçoes dos brancos de 6 indivíduos, sendo 4 dessas normais, uma lipêmica e outra hemolisada; isso garante que o método pode ser utilizado com confiabilidade para amostras de plasma de pacientes com alguma dessas características.

Efeito residual

A avaliaçao do efeito residual é importante para garantir que uma análise nao seja afetada por análises anteriores. Foi observado um resíduo inferior a 20% da resposta do analito nas amostras processadas do LIQ e inferiores a 5% da resposta do padrao substituto. O baixo efeito residual já era esperado, uma vez que uma limpeza da fibra era realizada após cada injeçao da amostra. A avaliaçao desse efeito residual serve como indicativo de que as etapas de limpeza realizadas foram bem-sucedidas.

Linearidade, Limite de Detecçao (LD) e Limite de Quantificaçao (LQ)

No estudo de linearidade do método e escolha do modelo matemático foram realizados testes estatísticos de heterocedasticidade,^31-33 que mostraram um alto valor de significância da regressao e uma baixa falta de ajuste para o modelo com 95% de confiança, segundo ANOVA, assim como uma melhora considerável no valor do coeficiente de correlaçao r_wi 0,999 (Tabela 4).

 

 

O MMQP (Método dos Mínimos Quadrados Ponderados) também forneceu menores valores de LD e LQ comparado ao MMQO (Método dos Mínimos Quadrados Ordinários) ou método tradicional de regressao, o que determina um modelo mais sensível e realístico do conjunto de dados. Embora os valores de LD e LQ desse estudo sejam mais elevados que os encontrados por Petropelou et al.,¹⁰ em que o LD e o LQ foram respectivamente, 0,03 e 0,11 ng mL^-1, utilizando um CG-EM/EM, ele nos proporciona uma boa sensibilidade, principalmente por avaliar a presença de carbaril pelo sinal de seu produto de degradaçao térmica 1-naftol. O valor de LD obtido neste trabalho, no entanto, foi menor do que o validado por Barr et al.,⁴⁵ que obtiveram 20 ng mL^-1 utilizando CG-EM.

Precisao e exatidao

A precisao e exatidao do método (Tabela 4) foram determinadas pela repetibilidade e recuperaçao intra e inter-corrida. As variaçoes máximas sao de 20% para o LIQ e de 15% para as demais concentraçoes; nesse estudo, as maiores variaçoes para CV% foram de 13,41% para o LIQ e de 12,73% para as demais concentraçoes e variaçoes máximas de recuperaçao 18,25% para o LIQ e 12,41% para as demais concentraçoes.

Aplicaçao do método em amostras de pacientes voluntários

Nenhuma amostra apresentou concentraçao do composto 1-naftol acima do limite de detecçao do método aqui proposto e essa nao detecçao pode ter ocorrido devido à rápida metabolizaçao do carbaril, seguida por sua eliminaçao através do sistema excretor, características essas nao estudadas nesse trabalho. Sugere-se, entao, que sejam realizados testes que observem o comportamento do analito no organismo, ou que as coletas, para esse tipo de análises, ocorram ao final do expediente e ainda no ambiente de trabalho, na tentativa de evitar possíveis processos metabólicos e eliminaçao do analito. Outro fator que pode ter contribuído bastante foi o fato de grande parte de trabalhadores que lidam diretamente com a aplicaçao dos agrotóxicos nao comparecerem à coleta de sangue, podendo essa ausência estar associada aos intensos conflitos registrados na regiao de Limoeiro do Norte-CE.^46-48

 

CONCLUSAO

As condiçoes para a análise de carbaril no plasma humano utilizando MEFS-headspace preservam a fibra, pelo fato de nao ocorrer o contato direto entre a fibra e material biológico, tornando o procedimento de preparaçao da amostra mais simples, com apenas 0,5 mL de amostra de plasma utilizado, demandando menores quantidades de solventes orgânicos, com menos custos associados e baixo impacto ambiental. O método proposto alcançou baixos limites de detecçao e quantificaçao, assim como boa precisao e exatidao, principalmente com a aplicaçao do Método dos Mínimos Quadrados Ponderados. Portanto, o método proposto pode ser considerado como uma boa alternativa no monitoramento de carbaril em plasma sanguíneo, pelo sinal analítico do 1-naftol.

 

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