JBCS

INTRODUÇAO

O café é uma das bebidas mais populares do mundo e a produçao e comercializaçao do grao representa uma atividade econômica importante para muitos países, incluindo o Brasil, que é o maior produtor mundial de café e o segundo maior consumidor.¹ As espécies de café mais importantes comercialmente sao o Coffea canephora Pierre ex A. Froehner e o Coffea arabica L. No Brasil, o café arábica representa 80% da produçao total de café.²

Os lipídios constituem uma das classes de compostos mais importantes no café e estao relacionados com a qualidade e as propriedades funcionais da bebida.³ Benefícios à saúde decorrentes do consumo moderado de café, como a reduçao da incidência de doenças crônico-degenerativas, têm sido reportados, assim como a correlaçao do consumo da bebida com a reduçao da taxa de mortalidade.⁴ A fraçao lipídica do café é composta principalmente por triacilgliceróis, esteróis e quantidades significativas de diterpenos com esqueleto do tipo caurano. O caveol (PubChem CID: 114778) e cafestol (PubChem CID: 108052) (Figura 1), principais representantes dos diterpenos no café, correspondem a 20% dos lipídios no grao e podem ser encontrados na forma livre ou esterificados com diferentes ácidos graxos, sendo a segunda forma a majoritária.^5-7 O interesse por estes compostos é reportado em diferentes estudos que investigam desde a contribuiçao à saúde pelo consumo de bebidas de café até a aplicaçao como parâmetro de qualidade, para identificaçao de espécies de café em blends comerciais.⁸ Bioativos de importância pela reconhecida capacidade antioxidante e as propriedades anticarcinogênicas e anti-inflamatórias, tem sido ainda citada a aplicaçao de diterpenos em produtos cosméticos.⁸ Considerando a dificuldade de síntese dos diterpenos e a restrita disponibilidade de compra e o alto preço dos padroes comerciais, metodologias eficientes para extraçao desses compostos, que permitam posterior purificaçao, sao também de interesse.⁹

Figura 1. Estruturas químicas do caveol e cafestol

A maior proporçao dos diterpenos do café encontra-se na forma esterificada, assim, para a extraçao de caveol e cafestol é necessário que ocorra uma etapa de hidrólise, como a saponificaçao ou a metanólise para a obtençao dos diterpenos livres.^10,11 Nos métodos que utilizam a saponificaçao, o tempo da reaçao varia de 1 a 4 h, o que torna o processo exaustivo e limitado. Portanto, é importante desenvolver novas metodologias para extraçao de caveol e cafestol, para a posterior aplicaçao destes compostos em potencial.

A literatura reporta duas abordagens para separaçao de diterpenos em café: a extraçao prévia dos lipídios seguida de saponificaçao,^5,12-14 ou metanólise,^10,15 com posterior separaçao dos compostos ou a saponificaçao direta seguida de separaçao com solvente orgânico.^16-22 Dias et al.,¹⁸ estudando extraçao de diterpenos de café, reportaram uma maior eficiência da saponificaçao à quente (em banho à 80 ºC, 1 h) comparativamente a saponificaçao à frio e a extraçao (Soxhlet ou Bligh & Dyer) seguida de saponificaçao à quente.

A utilizaçao de aquecimento em banho térmico apresenta limitaçoes quando há o interesse em adaptar procedimentos de um método analítico¹⁸ para uma extraçao em maior escala. Uma ampliaçao da proporçao amostra/solvente aumentaria ainda mais o tempo da reaçao de saponificaçao e restringiria a utilizaçao do aquecimento convencional, devido às zonas irregulares de aquecimento que sao formadas durante a transferência de calor por conduçao e convecçao.²³ Além disto, o caveol e o cafestol apresentam sensibilidade a ácidos, bases e oxidantes, a qual está relacionada à presença do anel furano.^24,25 Portanto, o controle da etapa de saponificaçao é muito importante, uma vez que durante a hidrólise os compostos ficam susceptíveis à mudanças na estrutura,^6,15 assim, condiçoes de estresse como variaçoes de temperatura devem ser evitadas.¹⁰

Como alternativa aos métodos convencionais de aquecimento, a utilizaçao do aquecimento por irradiaçao de micro-ondas é considerada uma técnica promissora por permitir a extraçao de diferentes compostos e melhorar processos químicos.^26-28 Entre as vantagens do uso de micro-ondas em reaçoes químicas em relaçao ao aquecimento convencional destacam-se a reduçao no tempo e aumento da taxa de reaçao, o aumento do rendimento e da seletividade e o menor consumo de energia, permitindo realizar transformaçoes mais seguras, com menor produçao de resíduos e em um maior número de amostras.^29,30 O emprego de uma reaçao de saponificaçao mais eficiente, e em maior escala, poderia viabilizar a extraçao de diterpenos da matriz de café torrado, permitindo seu posterior uso em produtos de alimentos ou farmacêuticos, ou, após purificaçao, como padroes analíticos.

Nao há informaçoes na literatura sobre o uso da energia de micro-ondas na reaçao de saponificaçao para extraçao de diterpenos. Assim, este trabalho teve como objetivo estudar os efeitos dos parâmetros de tempo e temperatura na saponificaçao assistida por micro-ondas para extraçao de caveol e cafestol em café torrado. A eficiência do processo de saponificaçao em micro-ondas foi verificada através do teor de caveol e cafestol extraído. Após a definiçao da melhor condiçao de processo, os resultados foram comparados aos obtidos utilizando como referência o método de saponificaçao em banho térmico.¹⁸

EXPERIMENTAL

A proposta da metodologia de saponificaçao em micro-ondas foi baseada e adaptada do método estabelecido por Dias et al.,¹⁸ que consiste na saponificaçao direta à quente da fraçao lipídica do café em banho termostático a 80 ºC durante 1 h, seguida da separaçao da fraçao insaponificável por separaçao líquido/líquido e quantificaçao dos diterpenos por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE).

Reagentes e padroes

Utilizou-se como reagentes para a etapa de saponificaçao: hidróxido de potássio (KOH) 85% (Synth, Diadema, Sao Paulo, Brasil) e etanol P.A. (Impex, Varginha, Minas Gerais, Brasil). Para a separaçao dos compostos e análise cromatográfica foram empregados terc-butil metil éter 99,5% (Sigma Aldrich, Steinheim, Alemanha), acetonitrila grau HPLC (Panreac, Barcelona, Espanha), água purificada (Sistema de purificaçao Milli-Q^®, Millipore, Billerica, EUA) e padroes analíticos de caveol e cafestol (pureza >98%, Axxora, San Diego, EUA) certificados pela Alexis Biochemicals (Lausanne, Suíça).

Material

As amostras de café arábica torrado comercial em grao (Spresso Melitta, Avaré, Sao Paulo) foram caracterizadas quanto à granulometria e umidade. O café foi moído em moedor (moinho Krups GVX 2, China) até a granulometria de 16 mesh. A umidade (4,95 g 100 g^-1) foi determinada em equipamento de infravermelho (OHAUS, Parsippany, EUA) à 105 ºC durante 7 min,¹⁸ e o resultado obtido foi utilizado para os cálculos do teor de caveol e cafestol em base seca.

Métodos

Reaçao de saponificaçao assistida por micro-ondas

A reaçao de saponificaçao foi realizada em equipamento de micro-ondas (Ethos One, Milestone, Itália), sob agitaçao fixa a 700 W. Em frasco de Teflon, adicionou- se 10 mL de hidróxido de potássio (2,5 mol L^-1) em etanol (96%) a 1,0 g de café torrado e moído. Optou-se em manter a proporçao original de 1:10 (m/v), utilizada por Dias et al.,¹⁸ mas ampliando-se a escala em cinco vezes. A reaçao de saponificaçao foi conduzida de acordo com as variaçoes das condiçoes de tempo e temperatura estipuladas pelo planejamento fatorial.

O perfil de aquecimento consistiu em uma rampa de aquecimento linear. A temperatura desejada (70, 80 e 90 ºC) foi alcançada em 2 min e manteve-se durante o tempo de reaçao (4, 8 e 12 min), seguido de um tempo de exaustao de 2 min, no qual o interior do equipamento atinge 65 ± 3 ºC. O equipamento de micro-ondas foi operado em modo de controle de temperatura, monitorado por sensor infravermelho.

Reaçao de saponificaçao em aquecimento convencional

Para saponificaçao em banho utilizou-se o método de referência,¹⁸ no qual 200 mg de amostra e 2 mL de hidróxido de potássio (2,5 mol L^-1) em etanol (96%) foram submetidos ao aquecimento (80 ºC) em banho termostatizado (MA 127/BO, Marconi, Piracicaba, Sao Paulo, Brasil) durante 1 h.

Extraçao do caveol e cafestol e preparo das amostras

A extraçao e o preparo das amostras foram realizados conforme descrito por Dias et al.¹⁸ Adaptaram-se os volumes de solvente devido a ampliaçao da escala em 5 vezes. Após a saponificaçao em micro-ondas, as amostras foram transferidas para tubos de centrífuga e adicionou-se 10 mL água destilada e 10 mL de terc-butil metil éter para a extraçao da fraçao insaponificável. Nas amostras saponificadas em banho, seguiu-se o mesmo procedimento, somente alterando o volume de 10 mL dos solventes para 2 mL. Em seguida, as amostras foram agitadas e centrifugadas (2 min a 3000 rpm) (Sovall SS-3, Ivan Sorvall, Nova Iorque, EUA). Para a coleta da fase orgânica, o processo de adiçao de solvente orgânico e centrifugaçao foi repetido três vezes. Após limpeza da fraçao insaponificável com água destilada (10-2 mL) o extrato orgânico foi coletado e o solvente evaporado em banho termostatizado a 70 °C (MA 127/BO, Marconi, Piracicaba, Sao Paulo, Brasil). O extrato foi ressuspendido em fase móvel, filtrado em membrana de PVDF Millex^® 0,22 µm (Millipore, Sao Paulo, Brasil) e acondicionado em tubos vials.

Análise cromatográfica

Para quantificaçao dos diterpenos, utilizou-se Cromatógrafo Líquido de Alta Eficiência (Shimadzu, Kyoto, Japao), com bomba com gerenciador de solvente quaternário e desgaseificador (DGU 20 A_S), auto amostrador (SIL20HT), válvula injetora (LC20AT) com alça de amostragem, forno para coluna (CTO 20A), detector UV/Vis (SPDM20A), interface e sistema de dados controlado pelo software LC solution. A análise cromatográfica foi adaptada de Dias et al.¹⁸ e Mori et al.²² Utilizou-se uma coluna Kinetex 2.6 µm C18 (150 mm x 4,6 mm) (Phenomenex, Torrance, EUA), eluiçao isocrática com fase móvel na proporçao de 3:2 de água e acetonitrila, vazao de 0,4 mL min^-1, volume de injeçao de 0,400 µL e detecçao a 230 nm (cafestol) e 290 nm (caveol). A temperatura da coluna foi mantida a 55 °C e o tempo de eluiçao foi 30 min. A injeçao das amostras foi feita em triplicata e a identificaçao dos compostos foi realizada com base nos tempos de retençao dos padroes e espectro no UV/Vis (Material Suplementar, Figura 1S). A quantificaçao foi feita por padronizaçao externa utilizando padroes comerciais, construindo-se curvas analíticas de 7 pontos, em triplicata, na faixa de 30 a 200 µg mL^-1 (R² ≥ 0,99, p < 0,001). O teor dos diterpenos foi expresso em base seca (bs).

Delineamento experimental e análise dos resultados

Para a etapa de saponificaçao em micro-ondas, utilizou-se como delineamento experimental um planejamento fatorial completo 3², totalizando 9 ensaios (Tabela 1), que foram conduzidos de forma aleatória. As extraçoes foram realizadas em triplicata. Como variáveis independentes foram estudadas a temperatura (X₁) e tempo (X₂), e como variáveis dependentes (y), o teor de caveol e cafestol. Os níveis escolhidos para tempo de reaçao (4, 8 e 12 min) foram baseados na literatura,^15,31,32 e para temperatura (70, 80 e 90 ºC), definiu-se como o ponto central (80 °C) a temperatura proposta na metodologia de referência.¹⁸

Os resultados obtidos pelo planejamento foram analisados utilizando o software Statistica^TM Version 7 (Statsoft, Tulsa, EUA),³³ gerando um modelo polinomial de segunda ordem (Equaçao 1).

em que B₁, B₂, correspondem aos coeficientes de regressao linear, B₁₁, B₂₂, os coeficientes de regressao quadrática, B₁₂, a interaçao entre os coeficientes lineares do modelo, B₁B₂₂ e B₁₁ B₂ as interaçoes entre termos lineares e quadráticos e B₁₁B₂₂ as interaçoes entre termos quadráticos.

Os efeitos lineares e quadráticos dos fatores e suas interaçoes foram estudados para cada composto, utilizando análise de variância (ANOVA) ao nível de 95% de confiança. A funçao desejabilidade foi empregada para maximizar conjuntamente os teores dos diterpenos utilizando o software Statistica^TM Version 7 (Statsoft, Tulsa, EUA).³³

Após definir a melhor condiçao de saponificaçao em micro-ondas, os teores de caveol e cafestol foram comparados aos obtidos por saponificaçao em banho térmico utilizando o método de referência.¹⁸ Para complementar a informaçao sobre a influência do tempo na saponificaçao, realizou-se um estudo do perfil do teor de diterpenos obtido na melhor temperatura de saponificaçao em funçao do tempo de reaçao. Para a etapa utilizando micro-ondas, empregaram-se os tempos de 4, 8, 12, 16, 20 e 24 min, e para o banho convencional, 5, 10, 20, 40, 60, 80 e 100 min.

RESULTADOS E DISCUSSAO

Conforme o delineamento experimental, os teores de caveol e cafestol obtidos por CLAE após saponificaçao em micro-ondas variaram de 314 a 474 mg 100 g^-1 e de 250 a 373 mg 100 g^-1, respectivamente (Tabela 1). Para a saponificaçao conduzida em banho, utilizada como método de referência, foi obtido teor de caveol de 629 mg 100 g^-1 e de cafestol de 582 mg 100 g^-1; esses valores encontram-se na faixa descrita na literatura para café arábica brasileiro.^11,34-36

Através da tabela de efeitos (Tabela 2), observa-se que a temperatura e o tempo sao parâmetros importantes, mas que exercem influência diferente sobre cada composto. As tabelas de ANOVA correspondentes estao disponíveis no Material Suplementar (Tabelas 1S e 2S).

Com base nos fatores significativos (p < 0,05) gerou-se o modelo matemático que descreve o efeito da temperatura (X₁) e do tempo (X₂) sobre a extraçao de caveol e cafestol (Equaçoes 2 e 3) na reaçao de saponificaçao em micro-ondas. Obtiveram-se coeficientes de determinaçao (R²) de 0,94 para a extraçao do caveol e de 0,91 para o cafestol, indicando boa qualidade no ajuste dos dois modelos.

Para o caveol, constatou-se que a temperatura (termo linear) e o tempo (termo linear e quadrático) exerceram efeito positivo; para o cafestol, o tempo (termo linear) também apresentou efeito positivo (p < 0,05), porém a temperatura nao teve efeito significativo (p > 0,05) (Tabela 2, Eq. 2 e 3). As demais interaçoes, para ambos os compostos, apresentaram efeito negativo, o que sugere a presença de uma faixa satisfatória de estudo, na qual atinge-se o máximo do teor de caveol e cafestol, seguido de reduçao, devido à formaçao de pontos de inflexao (Tabela 2, Equaçao 2 e 3, Figura 2). Esse comportamento demonstra que o tempo e a temperatura sao parâmetros importantes para a reaçao de saponificaçao e que as interaçoes entre eles sao limitantes no processo.

Figura 2. Superfícies de resposta para teores de caveol (A) e cafestol (B) obtidos por saponificaçao em micro-ondas sob diferentes condiçoes de temperatura e tempo

Observou-se que para o caveol e cafestol a regiao ótima de saponificaçao (Figuras 2A e 2B) ocorreu próximo ao tempo em nível superior (12 min) e em temperatura próxima ao ponto central (80 ºC). Para cafestol a temperatura de 80 ºC foi a melhor, independentemente do tempo de reaçao. Para o caveol, a utilizaçao de tempos próximos ao ponto central necessita do uso de temperaturas mais elevadas (>80 ºC).

Para os dois compostos, observou-se efeito positivo com aumento da temperatura até 80 ºC. Em temperaturas mais elevadas ocorre a diminuiçao da tensao superficial e da viscosidade do solvente, o que facilita a penetraçao do solvente na matriz e favorece o rompimento celular, permitindo que os compostos fiquem mais disponíveis para extraçao.³⁷ Com o uso de temperaturas menores que 80 ºC, mesmo por tempos prolongados, nao foi observada a mesma eficiência, indicando que essas condiçoes provavelmente nao sao suficientes para saponificar os ésteres de ácidos graxos diterpênicos.

No entanto, a utilizaçao de temperaturas superiores a 80 ºC também nao apresentou bons resultados, com reduçao do rendimento dos dois diterpenos. Embora os diterpenos tenham relativa estabilidade até mesmo a processos agressivos como o de torra,³⁸ durante a reaçao de saponificaçao estes compostos ficam suscetíveis a mudanças na estrutura, podendo ser degradados.¹⁵ Além disto, Chartier et al.³⁹ descrevem que a hidrólise é uma etapa crítica devido à sensibilidade do radical furano, e que essa sensibilidade está relacionada aos processos de aquecimento normalmente usados para obter os diterpenos.

O método de saponificaçao a quente desenvolvido por Dias et al.¹⁸ foi baseado no trabalho de Urgert et al.¹⁶, que propuseram a saponificaçao de café torrado a 80 ºC durante uma hora, porém a relaçao entre a reaçao de saponificaçao e a temperatura específica de 80 ºC nao é reportada. Chartier et al.³⁹ verificaram que a melhor condiçao de transesterificaçao para obtençao de caveol e cafestol em óleo de café arábica verde ocorreu na temperatura de 70 ºC. Oigman et al.¹⁰ descrevem que para obtençao dos diterpenos em óleo de café arábica verde por reaçao de metanólise em micro-ondas, a melhor temperatura foi de 100 ºC. Desta forma verifica-se que, para a separaçao dos diterpenos dos ésteres de ácidos graxos, a temperatura ótima depende do tipo de reaçao e do tipo de processo utilizado.

Observou-se que o efeito da temperatura foi maior para a extraçao do caveol que para a do cafestol, provavelmente devido a diferenças na estrutura dos compostos. Oigman et al.¹⁰ e Chartier et al.³⁹ reportam que em reaçoes de hidrólise, dependo das condiçoes, ambos os diterpenos sao afetados, porém o impacto sob caveol é maior do que sobre o cafestol.

O cromatograma correspondente à saponificaçao a 80 ºC em micro-ondas (Figura 3A) mostra um perfil similar ao obtido por saponificaçao em banho (Figura 3B) na mesma temperatura. Apesar do aquecimento em micro-ondas ter ocorrido mais rapidamente, nao foram observados picos de interferentes/produtos de degradaçao. Oigman et al.¹⁰ e Tsukui et al.¹⁵ na extraçao de diterpenos por metanólise e Liu et al.⁴⁰ na extraçao de trigonelina, ácido nicotínico e cafeína em café arábica também nao observaram formaçao de interferentes nas amostras submetidas a irradiaçao por micro-ondas.

Figura 3. Cromatogramas dos diterpenos, caveol e cafestol, em café arábica torrado obtidos após a saponificaçao em micro-ondas (80 ºC/12 min) (A) e em banho térmico (80 ºC/60 min) (B). Detecçao: 230 nm. Picos: caveol (1) e cafestol (2)

Considerando o interesse em maximizar a extraçao conjunta dos diterpenos, utilizou-se a funçao de desejabilidade global, uma técnica de otimizaçao simultânea, que indicou que a melhor condiçao de saponificaçao ocorreu em 80 ºC durante 12 min (Figura 4). Nessa condiçao, foram obtidos teores de caveol e cafestol de 474 ± 16 e 373 ± 14 mg 100 g^-1, respectivamente (Tabela 1). De acordo com os perfis de desejabilidade de tempo e temperatura (Figura 4), é possível observar que a temperatura foi otimizada, uma vez que temperaturas acima ou abaixo de 80 °C diminuem a quantidade extraída tanto de caveol quanto de cafestol. Entretanto, o aumento do tempo de processo poderia aumentar o conteúdo de diterpenos, pois 12 min foi o tempo máximo utilizado no planejamento fatorial, apesar da tendência ser de estabilizaçao próximo a 12 min.

Figura 4. Desejabilidade para caveol e cafestol obtidos por saponificaçao em micro-ondas e determinados por CLAE

Para isto estudou-se o perfil de saponificaçao em micro-ondas para cada composto (Figura 5A), fixando-se a temperatura da reaçao em 80 ºC e variando-se o tempo de 4 até 24 min. Para fins comparativos, estudou-se o perfil de saponificaçao em banho térmico, na mesma temperatura, variando-se o tempo de 5 a 100 min (Figura 5B). Observou-se comportamento similar para os dois compostos, tanto no tratamento por micro-ondas quanto em banho térmico.

Figura 5. Perfil da concentraçao de caveol e cafestol obtidos por saponificaçao em micro-ondas (A) e em banho térmico (B) a 80 ºC em funçao do tempo de reaçao

O uso de tempos superiores a 12 min nao foi eficiente para a saponificaçao em micro-ondas, havendo decréscimo no teor dos diterpenos em tempos mais prolongados. Em processos extrativos, durante o aquecimento por micro-ondas, devido à temperatura e à pressao altamente localizadas, ocorre migraçao seletiva de compostos a uma taxa mais rápida,^27,41 porém, embora as ondas eletromagnéticas sejam distribuídas uniformemente em funçao do aumento da temperatura reacional, em sistemas heterogêneos pode ocorrer o fenômeno de hot spots.^42,43 Este fenômeno consiste na formaçao de zonas irregulares de aquecimento, que podem estar relacionadas com a degradaçao dos compostos. Chen et al.⁴⁴ observaram que, mesmo em temperaturas fixas, tempos mais prolongados de irradiaçao das micro-ondas provocaram a degradaçao de saponinas.

Comparando-se os perfis das reaçoes de saponificaçao em micro-ondas (Figura 5A) e em banho térmico (Figura 5B), verificou-se que em ambos os casos há um aumento do conteúdo de caveol e cafestol até o tempo ótimo de reaçao (12 min para micro-ondas, 60 min para banho), seguido da reduçao dos diterpenos. A reduçao do tempo de reaçao verificado para a saponificaçao em micro-ondas deve-se a uma maior taxa de extraçao em comparaçao a reaçao em banho termostático (Material Suplementar, Figura 2S).

O tempo teve maior influência para reaçao conduzida em banho térmico do que para a reaçao em micro-ondas (Figura 5B). Aproximadamente 80% a mais dos diterpenos foram obtidos em 60 minutos do que em 40 minutos de reaçao. O tempo ótimo (60 min) de processo corrobora com o preconizado por Dias et al.¹⁸

Com relaçao à eficiência do processo, menores teores de caveol e cafestol foram obtidos pela reaçao de saponificaçao em micro-ondas (24% e 35%, respectivamente) comparativamente ao método de saponificaçao em banho. O menor rendimento, notadamente do cafestol, pode estar associado a uma menor eficiência no processo de saponificaçao ou a degradaçao térmica do composto.

Destaca-se, no entanto, que houve reduçao significativa do tempo (1/5 em relaçao ao aquecimento convencional), e que o processo em micro-ondas permitiu uma ampliaçao expressiva de escala (5 vezes). Segundo Zhou et al.,³⁰ reaçoes químicas conduzidas em micro-ondas ocorrem mais rapidamente devido à reduçao da energia de ativaçao da reaçao. Souza et al.⁴⁵ também descrevem que na saponificaçao por micro-ondas para obtençao de colesterol e óxidos de colesterol em camarao houve reduçao do tempo (75%) em relaçao ao método de saponificaçao a frio.

CONCLUSAO

A temperatura e o tempo influenciaram significativamente a reaçao de saponificaçao por micro-ondas para extraçao de caveol e cafestol em café arábica torrado. A melhor condiçao ocorreu a 80 ºC durante 12 min.

Utilizando a saponificaçao em micro-ondas obteve-se menor rendimento dos diterpenos, mas houve reduçao expressiva do tempo de processo em comparaçao a reaçao conduzida em banho térmico, sendo possível a ampliaçao da escala para extraçao com maior massa de amostra. A técnica de reaçao de saponificaçao em micro-ondas foi aplicada com sucesso, podendo ser considerada uma alternativa interessante para extraçao acelerada de diterpenos de café torrado.

MATERIAL SUPLEMENTAR

No material suplementar de livre acesso, disponível em http://quimicanova.sbq. org.br, constam os espectros de UV-vis do caveol e cafestol (Figura 1S), o gráfico de taxa de extraçao para saponificaçao em micro-ondas e em banho térmico (Figura 2S), e as Tabelas 1S e 2S exibem o resultado da Análise de Variância (Anova) para o modelo polinomial de segunda ordem que descreve a significância da temperatura e do tempo na reaçao de saponificaçao por micro-ondas para extraçao de caveol e cafestol em café arábica torrado.

AGRADECIMENTOS

Os autores agradecem ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) pelo suporte financeiro, ao Departamento de Química da Universidade Estadual de Londrina, em especial a equipe do Laboratório DIA (Laboratório de Desenvolvimento de Instrumentaçao e Automaçao Analítica), a Profa. Dra. Suzana Lucy Nixdorf, a Dra. Alexandra Maffei Monteiro e ao Prof. Dr. César Tarley pela disponibilizaçao dos equipamentos.

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